如何减少RNA的降解，获得完整性好的RNA？

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发表时间：2022-04-01 17:11

RNA极不稳定，易于降解。在RNA的相关实验中，RNA酶（RNase）是导致RNA降解最主要的物质。RNase的结构非常稳定且耐受性强，在一些极端环境可以暂时失活，但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白质抑制剂，不能使所有的RNase完全失活，所以RNA提取过程中应尽量避免RNase污染，减少RNA的降解。

一、减少RNA降解的方法

（1）控制外源性RNase污染来源。RNase存在于人的眼泪、唾液、粘液和汗液等体液，实验过程应佩带口罩和手套。接触门把手或普通物品表面，手套就可能沾上RNase，因此进行RNA实验时应勤换手套。RNase也存在于皮肤碎屑中、毛发上、呼出的气体、也可存在于空气灰尘中，提取过程应选择气流波动较少的区域。穿上实验服进行实验，可减少衣物上的颗粒掉入样本。

（2）使用RNase free（无RNA酶）的耗材。普通耗材仅进行高温高压灭菌操作无法破坏全部RNase活性，因为这些酶类耐受性强，而且降至室温后又会重新恢复部分活性。建议使用RNase-free的枪头和离心管等专用耗材。

（3）减少可能残留RNase的作用时间。对RNA病毒（YHV、TSV、IMNV、CMNV等）进行核酸提取后，立即进行RT-qPCR检测。

（4）RNA储存。待测病原体核酸类型为 RNA 时，建议提取完后马上上机检测，不能立即检测情况下，核酸溶液应于-70℃及以下储存。

（5）注意事项：

1. 实验过程严格佩戴口罩、手套；

2. 在走动较少的区域提取，减少空气流动；

3. 触摸皮肤（例如面部）、门把手及实验区域外的普通物体表面后更换手套；

4. 使用Rnase-free的离心管和枪头等耗材；

5. 提取过程尽量避免不必要的触碰，加快提取速度；

6 提取前打开qPCR仪器，编辑好运行程序，提前准备RT-PCR试剂，核酸提取完成之后，立即进行RT-PCR检测。

二、对虾病原体中的RNA病毒种类

对虾病原体中的RNA病毒种类有黄头病毒(YHV)、桃拉综合症病毒(TSV)、偷死野田村病毒(CMNV)、传染性肌肉坏死病毒(IMNV)等。这些RNA病毒严重威胁着对虾养殖业，华峰相关冻干型/RT-PCR荧光探针法检测试剂可以帮助了解对虾病原体携带情况及含量，从而指导提前预防或及早检出，降低经济损失。产品详情可通过华峰生物科技有限公司官网（http://www.hfbiotech.com/col.jsp?id=189）的产品中心进行了解，也可以直接向我们线上咨询。