水产养殖病害检测系列试剂盒Q&A

水产养殖病害检测系列试剂盒Q&A：

1.     取样随机误差性问题

(1)   病毒感染量低情况下，可能部分虾体带病毒，部分虾体不带病毒，用取样袋大量取样后，研磨混匀，可以提高带病毒虾体被采集的概率；

(2)   大量取样碾磨后，病毒被有稀释的可能，需要根据实际情况酌情增加取样量。可以考虑一份样本，分多个取样袋取样，进行多份PCR检测。

2.     样本的运输及保存

鲜活虾苗即可进行核酸提取效果最好，若无法即刻使用，建议-20℃冷冻保存（可选：可同时加入酒精延长保存时间，加入酒精的样本，使用前应离心后吸弃酒精），一周内进行核酸提取。

3.     取样量问题

(1)   少量样本（30-50mg）直接放入离心管，碾磨，加入裂解液裂解，涡旋震荡混匀或上下摇匀，使样品完全分散至裂解液中；

(2)   样本量较大情况下，放入取样袋充分碾磨，使样本混合均匀，取30-50mg柱离心管，加入裂解液，涡旋震荡混匀或上下摇匀，使样品完全分散至裂解液中；

4.     离心柱使用问题

(1)   裂解液中加入样本后，有可能会出现液体过于粘稠的状况，若用这种粘稠液体进行离心会堵塞离心柱，这种情况下建议：继续加入适量裂解液，边加边摇匀，直至粘稠度适当，不影响离心柱的使用。

(2)   离心柱的最大装液量为750ul，若裂解完成的样本离心后体积超过750ul，建议分多次，用同一离心柱进行离心，每次离心弃收集管液体。

5.     提取到的核酸模板如何储存

提取到的核酸模板应立即用于PCR扩增检测，建议剩余核酸模板-20℃储存用于复检，RNA病毒核酸模板储存不得超过3天（TSV/YHV/IMNV/CMNV），DNA病毒、细菌、肝肠胞虫核酸模板储存不得超过1月，长时间储存核酸浓度降低严重。

6.     PCR加样要求

控制加样时间，提前设置反应程序，准备好所有完所有试剂、耗材（包括需要的各种冻干PCR试剂、复溶液、核酸模板、阴阳性对照模板、枪头等），并用标签笔对PCR管做好标记，所有准备工作做好之后，按说明书要求加入复溶液和核酸模板，立即上机检测，保证加入复溶液、加入核酸模板、上机三个操作步骤之间没有其它时间间隙。

注：1、加样完成后不可用手接触PCR管底；

2、冻干试剂本身疏松多孔结构，在复溶过程中产生的微气泡容易粘在管壁，上机前，振荡器涡旋震荡或手指轻弹PCR管，然后1,0,000rpm以上高速离心30s-1min，然后上机检测。

7.     PCR扩增仪使用

(1)   使用前检查网络连接是否正常，确保数据能够正常传输。

(2)   固定与PCR扩增仪进行数据传输的电脑，取消电脑自动休眠模式，防止数据丢失。