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重大发现!副溶血弧菌在TCBS平板上显示为黄菌落?

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发表时间:2023-08-04 13:41
近日,技术人员从某沿海对虾养殖场中分离出一株新型弧菌,用toxR基因检测为副溶血弧菌,克隆该菌的toxR基因,并进行测序比对,与副溶血弧菌相似度高达100%,但是该菌株在TCBS平板生长的菌落颜色为黄色。

1.新型弧菌的鉴定

弧菌菌株为本实验室5-6月份从海南沿海对虾养殖场中南美白对虾体内分离到。采用TCBS平板分离纯化,挑选黄色单克隆菌株,经分子生物学实验鉴定,对toxR基因进行序列分析和同源性比对,与副溶血弧菌的同源性高达100%,如图1所示;对rpoD基因进行序列分析和同源性比对,显示与溶藻弧菌的同源性高达100%,如图2所示;该菌在TCBS平板上生长如图3所示。弧菌在TCBS上的显色特征和基因序列同源性分析的结果表明,该黄弧菌为溶藻弧菌。与以往接触的溶藻弧菌不一样的是,这株溶藻弧菌的toxR基因与副溶血弧菌的toxR基因序列一致。

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1 toxR基因测序峰图及序列比对


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2 rpoD基因测序峰图及序列比对


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3 TCBS上的生长


2.副溶血弧菌和溶藻弧菌的致病性比较

2.1副溶血弧菌

副溶血弧菌在TCBS上呈现绿色。该菌感染对虾的疾病较多,如红腿、黄鳃、断须、额剑等。副溶血弧菌常会继发或并发一些病毒病,从而导致大批量的死亡(死亡很大程度是因为副溶血弧菌的毒力影响)。

研究发现,急性肝胰腺坏死综合症(EMS),导致该病是一种具有两种毒力因子PirA、PirB的弧菌感染引起的,其中大多数是副溶血弧菌。该病发生后呈现发病范围广、速度快、发病季节不明显的特点。从症状上看,多表现为空肠、空胃、偷死等症状。肝胰脏肿大,质地松软,出现肝胰脏明显萎缩。对虾发病期间,通常在池塘水在缓慢流动或趴伏于池塘边坡上,失去食欲,空肠空胃,该病病情发展十分迅速,死亡率和排塘率极高,从发病少量到排塘,时间最短仅2~3天。


副溶血弧菌的致病机理还主要包括以下方面:
(1)产生溶血毒素,溶血毒素具有直接溶血性,可使对虾多种细胞发生溶血,溶解对虾血液、细胞致死;
(2)肠毒素作用,造致对虾消化道组织损伤,回肠糜烂,胃粘膜炎,甚至肝胰脏、消化功能紊乱;
(3)产生脲酶,使对虾肠液积聚产生肠道积水,严重者可能出现拉白便现象;
(4)胞外产物破坏对虾的体质,分解破坏对虾的组织成分,有利于病原的进一步侵染,使对虾免疫力明显下降,以致易引发其他多种疾病。

2.2溶藻弧菌
溶藻弧菌在TCBS上呈现黄色。溶藻弧菌作为条件性致病菌,其所在的水质条件、以及其他理化因素是影响其致病性的重要原因。溶藻弧菌的致病机理:主要取决于宿主,宿主所在的环境、菌本身之间的关系,致病病过程包括粘附、侵袭、体内增殖及产生毒素一系列过程。致病作用主要通过在其侵袭和增殖过程中对机体造成的细胞核组织损伤以及其代谢产物,毒素干扰和破坏机体的局部或全身的正常新陈代谢或机能而造成。

溶藻弧菌对虾具有致病性,其不同种类表现不同程度的毒性。其中对凡纳滨对虾(南美白对虾)致病后的主要症状为红体病:外观完整,全身性发红,肠胃空,肝胰脏微肿但颜色正常,头胸甲易剥离,但在剥离的头胸甲上未发现白斑症状。

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1 由溶藻弧菌引起的对虾主要疾病


综上所述,在对虾养殖中,副溶血弧菌的致病风险高于溶藻弧菌、副溶血弧菌的致病毒力也强于溶藻弧菌。


3.讨论

(1)推测副溶血弧菌的toxR基因已出现基因水平转移;

(2)副溶血弧菌和溶藻弧菌的致病性症状、毒力强弱,对药物的敏感、耐药都不同,应以区分,避免滥用药物,以免破坏对虾以及水体中的微生物群落,降低对虾免疫力,破坏水体稳定性。

(3)该株黄弧菌先后在海南、山东检出,有在全国扩散的趋势,苗场/养殖户在弧菌检测中,应避免将该株黄弧菌误检为副溶血弧菌。

华峰生物的副溶血检测试剂盒(PCR-荧光探针法),特异性强,灵敏度高,能准确区分副溶血弧菌和溶藻弧菌,避免错检漏检。


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参考文献:

[1]牟海津,李筠,包振民等.副溶血弧菌胞外产物对中国对虾的致病性分析[J].海洋与湖沼,2000,21(5):273-280.

[2]杨振泉,焦新安.副溶血弧菌毒力因子及其致病机理研究进展[J].中国人兽共患病学报, 2008, 24(11):1070-1073.

[3]许兵,纪伟尚,徐怀恕等.中国对虾病原菌及其致病性机理的研究[J].海洋学报,1993,15(1):98-106.

[4]陈强,鄢庆枇,马牲.弧菌致病性研究进展[J].海洋科学,2006.30(8):83-89.



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