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对虾病害检测中,为什么会用内标(IPC)?

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发表时间:2023-11-10 10:36
“内标”基因作为体现核酸检测质量的重要指标之一,通常指实时荧光定量PCR仪中的内参基因,能够对单个待测样本本身检测环节进行监测,用来质控采样含量、核酸提取、核酸扩增过程。“内标”分有“内源性内标”和“外源性内标”,下面小编将对华峰生物含内标基因的试剂作一个简单介绍。


1、什么是内标?

内标:内部检测标准,内标基因也称管家基因、内参基因、阳性内参(Internal Positive Control,IPC)等,通常选择在生物体各类细胞都能表达的基因,通过内标的设置,来监控提取和扩增过程,防止假阴性

2、“内源性内标”和“外源性内标”区别


内源性内标

外源性内标

试剂系列

V3.0/V3.1

V3.3/V3.4

概念

采用虾固有的看家基因,其表达水平受环境因素影响较小,在个体各个生长阶段的几乎全部组织中持续表达变化小。

外加到提取溶液中的,人工设计合成的与模板扩增效率相似的一段基因片段。

优点

①既可以监测是否采集到足量细胞,又可以检测提取和扩增检测过程;

②仅适用对虾来源样品。

①与目标基因序列存在形式相似,更好的反映因抑制物或提取效率不足而产生的“假阴性”。检测核酸提取及扩增检测过程

②对饲料、水样等非虾源样本同样有效。


3、常见异常内标曲线及原因分析

【1】外源性内标

⑴目标基因和内标均无扩增

可能原因:

多数为内标样本错加漏加、核酸加样时错加漏加;若连续多个样本存在此情况,考虑提取试剂、仪器的问题。


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目标基因有扩增但内标无扩增

常见原因:

应先明确目标基因是否同内标基因存在竞争或抑制作用,若不存在,可能为内标样本错加漏加。下图为典型高浓度样本抑制内标基因扩增。

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【2】内源性内标
⑴内标无扩增
此情况极为少见,因内源性内标基因与目标基因通常无竞争或抑制作用。

常见原因:采样失败或试剂失效。

内标的设置一开始就是为了避免“假阴性”的出现,监控整个反应过程是否顺利进行,无论是内源性还是外源性的内标都可以满足这个需求。此外,华峰生物也有不含内标的虾病害检测试剂,小主们可根据检测的不同样品、成本预算、实际情况等选择所需。


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