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实验室被污染了怎么办?

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发表时间:2021-03-08 10:45
一、确定污染类型

1、PCR实验室发生污染后主要表现为:

①所有同批次样品及阴性对照全部为阳;

②阴阳对照正常,所有样品检测均为阳;

③除了CT值靠前的样品外,其余样品及阴性对照CT值接近临近值,都有微弱翘尾。

出现以上三种情况,均可判为发生污染。PCR污染类型分为样品污染和产物污染。所谓样品污染一般发生在核酸扩增区,由使用被污染的耗材和样品交叉污染产生;产物污染有PCR扩增产物引起,一般发生在扩增分析区,由于PCR反应体系没有完全闭合或者扩增后的体系没有及时安全清理引起。

2、确认污染类型才能有效清除污染。发生污染后,更换所有一次性耗材即移液枪及使用新拆分试剂。有两种简易方法如下:
①不加内标重复实验,检测结果如果内标没有扩增,可判为样品污染,反之为产物污染。
②分A和B两组,A组在上机前,八联管开盖在核酸扩增区放置10min左右,B组闭合八联管直接上机。检测结果中若A组发生污染B组正常,则为气溶胶污染。气溶胶污染有两个来源,其一为扩增产物引起,其二为浓度较高的标本在制备过程中外释累积形成。

二、污染处理措施

一般而言,发生产物形成的气溶胶污染是很难在短时间内及时清理掉的,这是由PCR反应的特点决定的,及其微小的污染物都可以作为模板扩增,释放出巨大荧光信号。因此,很多试剂厂商都有相应的防污染试剂产品,可以有效防止产物污染,其原理为UNG酶对产物核酸片段的有效降解,而不影响我们从样品制备来的核酸模板。但是彻底消除污染,降低对UNG酶的依赖,还需要一套消除污染的体系来应对。具体如下:


1、全面规范操作:
①进行PCR操作时,工作人员应该严格遵守SOP操作规程。
②试剂准备、标本制备区、PCR扩增区及分析区设计要合理,要有一定的方向性。工作人员要谨循由试剂准备→标本制备→PCR扩增区及分析区的工作流程。
③任何一区的产物及器材不要拿到其它工作区。特别要提醒的是各区要有独立的打扫工具,切记不可窜用。
④使用一次性吸头,吸头不要长时间曝露于空气中,避免气溶胶污染。
⑤PCR试剂与样品分开保存,不应放于同一冰盒或同一冰箱。
⑥最后加入反应模板,加入后盖紧反应管。
⑦要轻拿轻放,开盖要轻,尽量避免气溶胶污的产生。
⑧每次实验完后,扩增产物都要及时密封后处理。
⑨每次做完实验,要养成对生物安全柜和超净工作台进行消毒的好习惯。


2、PCR实验室污染全面清理
污染发生后,需要对实验室各个部位、大型器材及角落进行彻底清理。具体如下:
(1)通风处理
    实验结束后将实验室通风3天左右为宜,但是一旦发生气溶胶污染,也不可避免的使得各个区都产生气溶胶污染,这也是由于PCR的敏感性决定的。针对气溶胶污染,最有效的是通风处理,即打开PCR实验室与外界空气的流通,从而快速使得污染区域的气溶胶被有效稀释。
(2)实验室垃圾处理
    使用过的废弃枪头、离心管等一次性耗材及时封闭处理掉,不能较长时间滞留废液桶和垃圾桶。另外废液桶使用前,灌入一定量的84消毒液或者次氯酸溶液。
(3)擦拭
    使用浸泡过84消毒液或者次氯酸溶液的干净桌布或者毛巾对超净工作台、实验桌面、离心机、移液枪等进行全面擦拭,对各区地面使用浸泡过的各区专用的拖把进行全面清理。

①仪器孔位:用棉签沾纯净水擦拭。

②移液枪:清水洗,并且需要拆洗(但不要弄坏枪),用棉签擦拭枪洞口。

③枪头管:丢掉,换新的使用。

④耗材、离心管架:75%酒精擦拭。

⑤离心机:用75%酒精擦离心孔以及离心机的盖子。

(4)紫外消毒

    核酸片段在强紫外光下极易降解变质,达到无法作为模板扩增的目的。擦拭结束后,对实验室各个区域并且在没有人在的情况下开紫外灯照射12小时左右。

(5)空气处理
    除了通风和紫外处理,可以使用纯水或者制成喷雾对实验室密集喷洒,能有效将空气中的污染物带到地面,然后执行擦拭和紫外照射处理。
   

以上为污染发生后实验室污染清理的基本过程,需要注意的是清理过程要每天执行,直到检测显示污染彻底清除为止。


三、如何判断实验室是否处理干净
应先在各个区将纯净水倒在瓶盖里,暴露30min后,以此为模板,直接加入到配制好的扩增试剂中(每个区做3个检测即可),上机检测,结果全为阴性,即说明实验室可以进行正常实验。


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