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如何减少RNA的降解,获得完整性好的RNA?

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发表时间:2022-04-01 17:11
RNA极不稳定,易于降解。在RNA的相关实验中,RNA酶(RNase)是导致RNA降解最主要的物质。RNase的结构非常稳定且耐受性强,在一些极端环境可以暂时失活,但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白质抑制剂,不能使所有的RNase完全失活,所以RNA提取过程中应尽量避免RNase污染,减少RNA的降解。
一、减少RNA降解的方法

1)控制外源性RNase污染来源。RNase存在于人的眼泪、唾液、粘液和汗液等体液,实验过程应佩带口罩和手套。接触门把手或普通物品表面,手套就可能沾上RNase,因此进行RNA实验时应勤换手套。RNase也存在于皮肤碎屑中、毛发上、呼出的气体、也可存在于空气灰尘中,提取过程应选择气流波动较少的区域。穿上实验服进行实验,可减少衣物上的颗粒掉入样本。

(2)使用RNase free(无RNA酶)的耗材。普通耗材仅进行高温高压灭菌操作无法破坏全部RNase活性,因为这些酶类耐受性强,而且降至室温后又会重新恢复部分活性。建议使用RNase-free的枪头和离心管等专用耗材。

(3)减少可能残留RNase的作用时间。对RNA病毒(YHV、TSV、IMNV、CMNV等)进行核酸提取后,立即进行RT-qPCR检测。

(4)RNA储存。待测病原体核酸类型为 RNA 时,建议提取完后马上上机检测,不能立即检测情况下,核酸溶液应于-70℃及以下储存。

(5)注意事项:

1. 实验过程严格佩戴口罩、手套;

2. 在走动较少的区域提取,减少空气流动;

3. 触摸皮肤(例如面部)、门把手及实验区域外的普通物体表面后更换手套;

4. 使用Rnase-free的离心管和枪头等耗材;

5. 提取过程尽量避免不必要的触碰,加快提取速度;

6 提取前打开qPCR仪器,编辑好运行程序,提前准备RT-PCR试剂,核酸提取完成之后,立即进行RT-PCR检测。

二、对虾病原体中的RNA病毒种类

对虾病原体中的RNA病毒种类有黄头病毒(YHV)、桃拉综合症病毒(TSV)、偷死野田村病毒(CMNV)、传染性肌肉坏死病毒(IMNV)等。这些RNA病毒严重威胁着对虾养殖业,华峰相关冻干型/RT-PCR荧光探针法检测试剂可以帮助了解对虾病原体携带情况及含量,从而指导提前预防或及早检出,降低经济损失。产品详情可通过华峰生物科技有限公司官网http://www.hfbiotech.com/col.jsp?id=189的产品中心进行了解,也可以直接向我们线上咨询。

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对虾桃拉综合症病毒(TSV)核酸检测试剂盒




文章参考来源:Super Lab.

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